疾病模型＆免疫缺陷鼠
ApoE小鼠
ApoE 基因敲除小鼠是通過同源重組技術(shù)制備的具有 3 號(hào)外顯子純合缺失的小鼠模型。2017 年斯貝福（北 京）生物技術(shù)有限公司從國(guó)家嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種子中心引入培育。
特征
1.ApoE 小鼠模型表現(xiàn)出異常高血脂癥狀，在 3 月齡時(shí)即出現(xiàn)動(dòng)脈脂肪堆積，17 月齡時(shí)小鼠腦內(nèi)將出現(xiàn)脂瘤性纖維瘤。
2.學(xué)習(xí)記憶能力出現(xiàn)障礙，其與 CHD、高脂血癥、腦梗塞、AD 及慢性乙型肝炎等疾病相關(guān)。
用途
用于研究 ApoE 基因相關(guān)疾病，如糖尿病與肥胖研究，心血管研究，動(dòng)脈粥樣硬化研究以及新陳代謝研究。
成長(zhǎng)曲線
生理生化數(shù)據(jù)
樣本信息和目的
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樣本：ApoE小鼠
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目的：確認(rèn)ApoE小鼠基因修飾類型
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靶基因：ApoE apolipoprotein E（apoE）
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NCBI號(hào)：11816
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NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/11816
方法和結(jié)果
ApoE（apolipoprotein E）是載脂蛋白 E，一種脂肪結(jié)合蛋白（載脂蛋白），乳糜微粒和中密度脂蛋白（IDLs）的一部分。ApoE 主要負(fù)責(zé)運(yùn)輸脂蛋白、脂溶性維生素及膽固醇。ApoE 基因位于 Chr7 上，共有 7 個(gè)外顯子。
查詢目前所有 ApoE 敲除品系的設(shè)計(jì)方案和基因型鑒定方案，結(jié)果顯示目前的方案主要有兩種：胚胎干細(xì)胞技術(shù)和 CRISPR/Cas9 方案，針對(duì)兩種方案分別設(shè)計(jì)擴(kuò)增和測(cè)序引物，具體方案如表1：
ApoE 純合子靶基因 PCR 擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如圖 2，結(jié)果顯示，該動(dòng)物為 ES 干細(xì)胞法制作的 ApoE 突變小鼠。
注：1、2為方案1擴(kuò)增結(jié)果，3、4為方案2擴(kuò)增結(jié)果，5、6為方案3擴(kuò)增結(jié)果。1、3、5泳道基因組模板為ApoE小鼠，2、4、6泳道為空白對(duì)照組，模板為水。
ApoE 突變小鼠是 Nobuyo Maeda 博士在 The University of North Carolina 開發(fā)的，他們使用胚胎干細(xì)胞技術(shù)產(chǎn)生 ApoE 基因突變的小鼠品系，質(zhì)粒載體設(shè)計(jì)方案如圖 3：
使用oIMR0180和oIMR0182 引物對(duì)靶基因進(jìn)行擴(kuò)增，并進(jìn)行雙向 Sanger 測(cè)序。與 NCBI 報(bào)道的 ApoE 基因外顯子序（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_009696.4）比對(duì)，結(jié)果顯示：oIMR0180 引物正向測(cè)序比對(duì)失?。ńY(jié)果未顯示），oIMR0182 反向測(cè)序，ApoE 基因 3 號(hào)外顯子部分序列可以擬合。ApoE 基因外顯子序列上 289 號(hào)堿基開始3號(hào)外顯子剩余序列被Neo基因（新霉素抗性基因 ）所取代（如圖 4）。ApoE 基因其他外顯子擴(kuò)增測(cè)序結(jié)果未顯示突變。
結(jié)論
斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司 ApoE 小鼠的基因編輯類型為：ApoE 基因3號(hào)外顯子部分堿基（125bp）和部分內(nèi)含子被 Neo 基因取代，其他外顯子無突變。
