疾病模型＆免疫缺陷鼠
SCID Beige
該品系為 Prkdcscid 和 Lystbg 常染色體隱性突變同類系 (congenic) 小鼠，由 Croy 等在 Guelph 大學通過 C.B-17-Prkdcscid 和 C57BL/6-Lystbg 小鼠的雜交得到。該品系 B、T 淋巴細胞功能缺失，同時自然殺傷細胞 (NK細胞) 功能低下，SCID Beige 小鼠主要臟器重量除脾臟和胰腺減重外，其它內臟連續(xù)增加，年齡都會影響總膽固醇和高密度載脂膽固醇濃度。
特征
該突變基因小鼠血清中缺乏免疫球蛋白，其細胞在活體外對測試 B 或 T 細胞功能的免疫學實驗不發(fā)生反應，在組織病理反面表現(xiàn)為淋巴組織重度淋巴細胞減少。
用途
1.應用于人類生理學、病理學、免疫學和血液病學等方面的研究。
2.能接受人體正常組織的移植而成為一種嵌合體小鼠（即SCID-hu模型）進行人體免疫功能重建和腫瘤學方面的研究。
生理生化數(shù)據(jù)
基因鑒定報告：
-
樣本信息和目的：
-
樣本：SCID Beige小鼠
-
目的：確認SCID Beige小鼠基因修飾類型
-
靶基因：Prkdc Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide
-
NCBI號：19090
-
NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/19090
-
靶基因2：Lyst lysosomal trafficking regulator
-
Gene ID：17101
-
NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/17101
方法和結果
PRKDC（Protein kinase, DNA activated, catalytic polypeptide，DNA 依賴性蛋白激酶，又名 scid）能識別和傳遞DNA 斷裂損傷信號，當細胞 DNA 發(fā)生斷裂損傷后，PRKDC 復合物就聚合在損傷位點上，隨之蛋白激酶被活化，募集并磷酸化其下游的 DNA 修復蛋白啟動DNA斷裂修復。此外，PRKDC 在維持端粒穩(wěn)定性，免疫蛋白質的位置特異性重組中也發(fā)揮重要的作用。Prkdc 基因位于小鼠 16 號染色體上，有 87 個外顯子。
由之前的 NOD-SCID 小鼠鑒定報告（SPF2020102001ZJY）發(fā)現(xiàn)：SCID 系列小鼠的基因突變類型為 Prkdc 基因85號外顯子發(fā)生單核苷酸改變（T突變?yōu)?/span>A）后，提前引入終止密碼子，導致蛋白翻譯提前終止。堿基突變后PRKDC蛋白預測將截短83個氨基酸。我們使用該報告（SPF2020102001ZJY）中的鑒定引物（Prkdc-ex85-F：5'-TATGTGGACTTCTTCTCACC-3' Prkdc-ex85-R: 5'-GGTAAAGCCGCCCTAAGAGT-3'，產(chǎn)物長度：454 bp ）、以 6 個 SCID Beige（BG）小鼠的鼠尾基因組為模板進行PCR擴增，電泳結果如下：
每兩個 PCR 產(chǎn)物混合并進行 Sanger 測序結果，結果顯示（圖 3 ）：6 只 BG 小鼠的均為 Prkdc 基因 85 號外顯 子單核苷酸改變（T 突變?yōu)?nbsp;A），即為 SCID 基因突變。
Lyst（lysosomal trafficking regulator，溶酶體轉運調節(jié)因子；又名 Beige）是一種蛋白質編碼基因，并可能參與色素沉著。Lyst 基因突變可能與 Chediak-Higashi綜合征（CHS）相關。Lyst 基因位于 13 號染色體上，有 55 個外顯子（圖 4）。
但 Lyst 基因轉錄本201（http://asia.ensembl.org/Mus_musculus/Tran/Exons?db=core; g=ENSMUSG00000019726; r=13:13590397-13778803;t=ENSMUST00000110559）僅顯示 53 個外顯子（圖 5）。文獻報道顯示，BG 小鼠的 Lyst 基因突變是“外顯子 54 中 3bp 缺失的結果，導致該蛋白羧基末端附近的 3741 位密碼子處異亮氨酸缺失”，在轉錄本 201 中比對顯示基因突變位置位于 Lyst 基因外顯子 52 上。針對Lyst基因外顯子52 和53 設計引物：bg-Ex52-F:5’-TGCAGTAGGTTATCCTGGCA-3’,bg-Ex52-R:5’-GAAGCCTTCACACCTGCATTC-3’（擴增長度303bp）; bg-ex53-1F:5’-CAGTCTGCTGGCCGTCTTTT-3’,bg-ex53-1R:5’-TGGGTGTGCTGAGTATAGGG-3’（擴增長度 631bp），并進行 PCR 擴增和測序（圖6）。比對結果顯示，Lyst 基因外顯子52 有 3bp 缺失（CAT），導致該蛋白 3740 位和 3741 位密碼子處兩個異亮氨酸突變?yōu)?nbsp;1 個異亮氨酸（圖7-8）；外顯子 53 無突變（結果未顯示）。
結論
斯貝福（北京）生物技術有限公司 SCID Beige 小鼠的基因編輯類型為：Lyst 基因外顯子 52 有 3bp 缺失（CAT），導致該蛋白 3740 位和 3741 位密碼子處兩個異亮氨酸突變?yōu)?nbsp;1 個異亮氨酸；Prkdc 基因 85 號外顯子單核苷酸改變（T 突變?yōu)?nbsp;A）。
