實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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分子互作實(shí)驗(yàn)
? 服務(wù)介紹
雙熒光素酶檢測(cè)利用兩種不同的熒光素酶（如螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素酶）的相對(duì)表達(dá)量來(lái)檢測(cè)特定基因的活性。通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中兩種熒光素酶的發(fā)光強(qiáng)度，可以準(zhǔn)確評(píng)估靶基因的表達(dá)水平或啟動(dòng)子的活性。
①雙熒光素酶-靶基因檢測(cè)：在雙熒光素酶系統(tǒng)中，通常將目標(biāo)基因的調(diào)控序列（如啟動(dòng)子）與螢火蟲(chóng)熒光素酶基因連接在一起。當(dāng)目標(biāo)基因被激活時(shí)，螢火蟲(chóng)熒光素酶會(huì)發(fā)出熒光，從而實(shí)現(xiàn)靶基因的檢測(cè)。
②雙熒光素酶-啟動(dòng)子檢測(cè)：通過(guò)將感興趣的啟動(dòng)子序列克隆到熒光素酶報(bào)告基因的上游，檢測(cè)啟動(dòng)子的活性。不同條件下啟動(dòng)子活性的變化可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)反映，從而研究基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。
? 載基服務(wù)優(yōu)勢(shì)
實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢(shì)：①免費(fèi)、專業(yè)的結(jié)合分析；
②豐富的載體選擇，免費(fèi)提供293T作為工具細(xì)胞；
③快速的克隆構(gòu)建；
④完善的配套細(xì)胞學(xué)驗(yàn)證。
? 實(shí)驗(yàn)步驟
1.酶標(biāo)儀先開(kāi)起來(lái)預(yù)熱。
2.小心吸棄培養(yǎng)液，PBS洗一次。
3.5x的細(xì)胞裂解液用PBS稀釋成1x，500ul/孔，搖勻后室溫靜置10min，直到細(xì)胞全部裂解下來(lái)。
4.底物配置：螢火蟲(chóng)：干粉+稀釋液，混勻后直接使用，100ul/孔。海腎：50x的原液用稀釋液稀釋成1x，100ul/孔。每個(gè)樣本3個(gè)復(fù)孔，空白對(duì)照3個(gè)復(fù)孔，例6個(gè)樣本，要配（6*3）+3=21個(gè)孔，多配2孔的量避免加樣過(guò)程的消耗，也就是23孔*100ul=2300ul的螢火蟲(chóng)和海腎的量。配完這兩個(gè)底物要避光保存。
5.將裂解物吹打下來(lái)，收集到1.5ml的EP管中（避免氣泡），12000g，5min離心，收集200ul的上清液到新管中。
6.取出黑色96孔板，先加100ul的螢火蟲(chóng)底物到孔中，隨后立即加入20ul的樣本上清液（速度要快，不要有氣泡），上機(jī)測(cè)螢火蟲(chóng)的值，保存數(shù)據(jù)。
7.再疊加100ul海腎底物，上機(jī)測(cè)海腎的值，保存數(shù)據(jù)。
發(fā)貨標(biāo)準(zhǔn)：雙熒光素酶檢測(cè)原始數(shù)據(jù)、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告和數(shù)據(jù)分析。
客戶提供：基因名稱和種屬進(jìn)行評(píng)估和報(bào)價(jià)
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? 實(shí)驗(yàn)交付
